倒置熒光顯微鏡，是指與一般顯微鏡相比，其物鏡、聚光鏡和光源的位置都顛倒過(guò)來(lái)，由熒光附件與顯微鏡有機(jī)結(jié)合構(gòu)成的顯微鏡。激發(fā)光從物鏡向下落射到標(biāo)本表面，被反射到物鏡中并聚集在樣品上，樣品所產(chǎn)生的熒光以及由物鏡透鏡表面、蓋玻片表面反射的激發(fā)光同時(shí)進(jìn)入物鏡，經(jīng)雙色束分離器使激發(fā)光和熒光分開(kāi)而成像。物鏡和聚光鏡的工作距離很長(zhǎng)，能直接對(duì)培養(yǎng)皿中的被檢物體進(jìn)行顯微觀察和研究。

 

倒置熒光顯微鏡使用時(shí)可能需要的問(wèn)題有哪些？

 

1、正確觀察白光的步驟？

 

將標(biāo)本置于載物臺(tái)上，打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)；將轉(zhuǎn)盤(pán)聚光器調(diào)整到明視場(chǎng)，然后將環(huán)狀光闌調(diào)整到z大光圈；從低倍鏡開(kāi)始觀察。

 

2、相差環(huán)中BF/PHL/PH2等這些字母到底是什么意思？

 

倒置熒光顯微鏡本身是結(jié)合了熒光附件和相差顯微鏡的特點(diǎn)。那么在相差環(huán)中的這些字母分別代表了：PHL(4×0.13)、PH1(20×0.45)、PH2(40×0.6)、BF代表的是白光。所以如果我們觀察的是熒光，前三種相差是都可以選擇的。所謂的相差可以理解成是對(duì)于透明結(jié)構(gòu)的放大處理，因?yàn)榧?xì)胞本身內(nèi)部結(jié)構(gòu)是透明的，我們想觀察細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)的時(shí)候就需要使用相差。

 

3、無(wú)論怎么調(diào)整細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，鏡下的圖像都不清楚？

 

這種情況下很可能是鏡頭不干凈，可以用酒精棉擦拭一下鏡面。另外高倍數(shù)的物鏡鏡頭外也有一個(gè)旋鈕，適當(dāng)旋轉(zhuǎn)這個(gè)旋鈕也會(huì)使畫(huà)面變得清晰。

 

4、正確觀察熒光的步驟？

 

關(guān)閉室內(nèi)的燈光，打開(kāi)白光電源和汞燈電源，一般汞燈需要提前打開(kāi)10分鐘預(yù)熱才能達(dá)到zui亮；關(guān)閉熒光shutter，用低倍鏡找到細(xì)胞位置；關(guān)閉透射光按鈕，打開(kāi)熒光光路shutter，旋轉(zhuǎn)熒光濾色轉(zhuǎn)盤(pán)；電腦顯示器中觀察。

熒光光路shutter要zui后打開(kāi)，zui先關(guān)閉，這樣可以保護(hù)樣本，避免過(guò)度的熒光猝滅。

 

5、如何維護(hù)汞燈？

 

汞燈在工作時(shí)會(huì)散發(fā)出較大的熱量，因此要保持室內(nèi)溫度不要過(guò)高，具有良好的散熱環(huán)境。一個(gè)汞燈的工作壽命一般是200個(gè)小時(shí)，但并不是使用時(shí)間越短，觀察的越快，越能延長(zhǎng)汞燈的壽命。相反的，如果工作時(shí)間越短，反而會(huì)讓汞燈壽命減少的越快，所以要盡量減少開(kāi)關(guān)的次數(shù)。

 

6、為什么目鏡下觀察到的圖像只有一半兒？

 

出現(xiàn)這種情況的原因一般是CT環(huán)調(diào)整出現(xiàn)了問(wèn)題。CT環(huán)位于目鏡下方，也叫合軸調(diào)中目鏡，有CT/O/S三個(gè)參數(shù)設(shè)置。CT對(duì)應(yīng)的是光路對(duì)準(zhǔn)了望遠(yuǎn)鏡；O對(duì)應(yīng)的是光路中沒(méi)有物體；S對(duì)應(yīng)的是光路中有遮光板。那么上述情況就是CT環(huán)這個(gè)螺旋位于CT和S兩個(gè)參數(shù)之間。