光學(xué)顯微鏡的相差觀察方式（Phase Contrast，簡(jiǎn)稱PC）是一種利用光的干涉原理來(lái)增強(qiáng)樣品與背景之間對(duì)比度的觀察方法。這種方式特別適用于觀察無(wú)色透明的樣品，如活細(xì)胞、微生物等。以下是對(duì)相差觀察方式的詳細(xì)介紹：

一、相差成像原理

相差觀察方法利用樣品的厚度和折射率引起的相位差，通過(guò)光學(xué)系統(tǒng)的轉(zhuǎn)換，將這個(gè)相位差轉(zhuǎn)換成振幅差（即亮度差），從而提高樣品的可見(jiàn)度和對(duì)比度。具體來(lái)說(shuō)，當(dāng)光線通過(guò)樣品時(shí)，由于樣品不同部分的折射率不同，光線會(huì)發(fā)生不同程度的折射和相位延遲。這些相位差異在通過(guò)相差物鏡和相差聚光鏡時(shí)，會(huì)被轉(zhuǎn)換成振幅差異，使得樣品的不同部分在視野中呈現(xiàn)出不同的亮度，從而提高了樣品的清晰度和可見(jiàn)度。

二、相差顯微鏡的構(gòu)造特點(diǎn)

相差顯微鏡在構(gòu)造上有兩個(gè)主要特點(diǎn)：

相差聚光鏡：在聚光鏡的下方裝有環(huán)形光闌（Annular Diaphragm），形成環(huán)形光照明。這個(gè)環(huán)形光闌的直徑和孔寬與物鏡內(nèi)的相位環(huán)板匹配，使得光線在通過(guò)樣品后能夠形成特定的相位差。

相差物鏡：相差物鏡的鏡片中裝有相位板（Phase Plate），這個(gè)相位板通常由氟化鎂等材料制成，能夠?qū)⒅鄙涔饣蜓苌涔獾南辔煌七t1/4波長(zhǎng)。根據(jù)相位板的不同設(shè)計(jì)，相差可以分為正相差和負(fù)相差兩種類型。

三、相差觀察的特點(diǎn)

無(wú)需染色：相差觀察方法Z大的優(yōu)點(diǎn)是不需要對(duì)樣品進(jìn)行染色處理，就可以直接觀察到無(wú)色透明的樣品，如活細(xì)胞等。

高對(duì)比度：通過(guò)相位差轉(zhuǎn)換成振幅差的方式，相差觀察能夠顯著提高樣品與背景之間的對(duì)比度，使得樣品的細(xì)節(jié)更加清晰可見(jiàn)。

廣泛應(yīng)用：相差觀察方法在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、材料科學(xué)等領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用，特別是在細(xì)胞生物學(xué)和微生物學(xué)研究中，相差顯微鏡是不能缺少的工具之一。

四、相差觀察的操作步驟

準(zhǔn)備樣品：將待觀察的樣品放置在載物臺(tái)上，并用壓片夾固定好。

對(duì)光：打開(kāi)顯微鏡的電源開(kāi)關(guān)，調(diào)節(jié)光源和聚光鏡，使光線形成環(huán)形光照明。

放置相差物鏡：將相差物鏡安裝在物鏡轉(zhuǎn)換器上，并旋轉(zhuǎn)到工作狀態(tài)。

調(diào)節(jié)焦距：使用粗調(diào)和細(xì)調(diào)螺旋調(diào)節(jié)焦距，使樣品在視野中清晰可見(jiàn)。

觀察：通過(guò)目鏡觀察樣品，并調(diào)整光源強(qiáng)度和光圈大小以獲得Z佳的觀察效果。

五、注意事項(xiàng)

選擇合適的物鏡和聚光鏡：不同倍數(shù)的物鏡需要配合相應(yīng)倍數(shù)的相差聚光鏡使用，以確保獲得Z佳的相差效果。

保持樣品清潔：樣品表面B須清潔無(wú)塵，否則會(huì)影響觀察效果。

調(diào)節(jié)光源強(qiáng)度：光源強(qiáng)度應(yīng)適中，過(guò)強(qiáng)或過(guò)弱都會(huì)影響觀察效果。

避免震動(dòng)：在觀察過(guò)程中應(yīng)避免顯微鏡受到震動(dòng)或沖擊，以免影響成像質(zhì)量。

總之，相差觀察方式是光學(xué)顯微鏡中一種重要的觀察方法，它利用光的干涉原理提高了樣品與背景之間的對(duì)比度，使得無(wú)色透明的樣品也能夠清晰可見(jiàn)。在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的研究中發(fā)揮著重要作用。